經口急性毒性試驗
※<(一)目的>
化學毒物經口急性毒性試驗是研究化學物毒性效應的基本試驗。奉實習的目的是學習急性毒性試驗的實驗設計原則，學會經口灌胃技術、隨機分組方法，掌握主要的LD50計算方法和急性毒性分級標準。
※<(二)原理>
選擇健康的實驗動物，根據體重按隨機分組的方法，依據LD50計算的設計原則將動物分成數個染毒組。一次或24h內多次給予受試物后，了解動物所產生的急性毒性反應及其嚴重程度，中毒死亡的特征以及可能的死亡原因，觀察受試物毒性反應與劑量的關系，求出半數致死劑量(LD50)，并根據LD50值將受試物進行急性毒性分級。
※<(三)內容>
1．健康小鼠或大鼠的選擇，性別的辨認。
2．稱重、編號和隨機分組方法。
3．受試化學物溶液的配制。
4．小鼠和大鼠經口灌胃操作技術．
5．毒性體征的觀察、LD50計算和毒性分級
※<(四)材料和試劑>
1.實驗動物 健康成年小鼠或大鼠若干只。
2.器材 灌胃針(大鼠、小鼠適用)、注射器(0.25，1.2，5m1)、吸管(0.1，0.2，0.5，1，2，10ml)、容量瓶(10，25，50ml)、燒杯(10，25，50ml)、滴管、電子天平(感應量1／10000g)、動物體重秤、外科剪刀、鑷子。
3.試劑 受試物(由指導教師自定)，苦味醒酒精飽和液，o．5％品紅溶液或其他染色劑．
※<(五)操作步驟>
1．健康動物的選擇。
2．性別辨認。
3.動物稱重、編號和分組；
(1)稱重；稱量大、小鼠體重的秤，其感應量需在0.1g以下，并經過校正。稱量時注意輕抓輕放動物，避免激惹，等動物安靜后記錄體重讀數，以g表示。
(2)編號：以染色法編號。用苦味醒酒精飽和液為染料。以黃色為個位數號碼，紅色為十位數號碼。一股以頭部為1號，按順時針依次右前肢為2號，右腰為2號，右后肢為4號，尾根部為5號，右后肢為s號，左腰為7號，左前肢為8號，后背為9號，10號為在頭部染紅色標記，11號在右前肢染紅色和黃色標記各一，依次類推。
(3)隨機分組。
4．劑量設置 由指導教師根據受試物類別，選擇LD50計算方法設計劑量組。
5．受試物的配制
(1)量取受試物：固體化學物采用稱量法，液體化學物可用稱量法或吸量法
1)稱量法：將受試物放入已知重量的容器內稱重。加溶劑溶解或稀釋，傾入刻度容器（如容量瓶)內，混勻，再加溶劑至刻度。算出濃度(rog／mi)備用。
2)吸量法：依設計劑量計算出應吸取液態受試物的容積，加入容量瓶中，用溶劑加至
刻度。計算公式為：
X＝A*V/d*1000
式中；x：應吸取受試物的容積(mD；
A：設計要求的受試物濃度(mg／ml：
V：容量瓶容積(m1)；
d；受試化學物比重。
(2)受試物的稀釋
1)等濃度稀釋法：將受試化學物配成一種濃度，此時各劑量組的實驗動物將給予不同體積的受試物。例如受試物配成1000mg／lOml的溶液，五個劑量組的劑量分別為100、200、400、800、1600mg／kg，則各劑量組動物將依次給予1.0mi／kg、2．Omi／kg直至最高劑量組的16mi／kg。
2)等容量稀釋法：按照事先設計的劑量分別稀釋配制為幾種不同濃度的受試物溶液，各個劑量組的動物均給予相同單位體重體積的受試化學物。如上例的情況，將受試物別配成l00mg／10ml、200mg／l0ml、400mg／10ml、800mg／10ml、1600mg／10ml 5個濃度，溶液，各劑量組動物給予受試物的體積均為l0ml／kg。
6、灌胃操作 小鼠、大鼠及豚鼠灌冒法：采用專用小鼠和大鼠灌胃針，也可自制。將頭的16號注射針(適用于小鼠)或20~24號腰穿針(適用于大鼠、豚鼠)(注意事先可用錫在針尖周圍焊一圓頭，使其不易損傷動物的消化遭)安裝在適當容積的注射器上，吸所需的受試物溶液，左手抓住動物雙耳后至背部的皮膚(小鼠僅抓住耳后、頸部的皮膚，無名指、小手指和大魚際肌將其尾根部壓緊)，將動物固定成垂直體位，腹部面向操作。注意使動物的上消化道固定成一直線。右手持注射器，將針頭由動物口腔側插入，避牙齒，沿咽后壁緩緩滑人食管。若遇阻力，可輕輕上下滑動探索，一旦感覺阻力消失，即深人至胃部。如遇動物掙扎，應停止進針或將針拔出，千萬不能強行插入，以免穿破食，甚至誤入氣管，導致動物立即死亡。
一般進針深度小鼠2.5～4cm，大鼠或豚鼠4～6cm。為了驗明是否已正確地插入胃部，可輕輕回抽注射器，如無氣泡抽出，表明已插入胃中；如有大量氣泡，則提示誤插氣管，應抽出重插。隨后將受試物溶液注入。灌胃容量小鼠通常為o．2～1ml，大鼠1～4ml，豚鼠l～5ml。
7．中毒體征和動物死亡情況觀察 染毒后注意觀察毒性體征和死亡情況。高劑量組動物的死亡常很快發生，染毒后應即刻密切觀察。觀察和記錄中毒體征及出現的時間、死亡數量和時間及死亡前的特征。根據觀察情況分析中毒特點和毒作用靶器官．
LD50計算：根據受試物的種類由指導教師事先確定采用何種方法(改進寇氏法、霍恩法等)進行計算，并在試驗前設計劑量分組和每組動物數。選擇適宜的方法求出LD50及95％的可信限范圍．如毒性反應存在性別差異，應分別求出不同性別動物的LD50值。
※<（六）結果評定>
根據實驗動物中毒體征、死亡時間和特征、LD50，按受試物種類急性毒性分級標準進行評定，判斷該受試物的毒性大小及毒性特征。
