利用紫外光、可見光、紅外光和激光等測定物質 的吸收光譜對物質進行定性定量分析和物質結構分 析的方法，稱為分光光度法或分光光度技術，使用的 儀器稱為分光光度計。分光光度計靈敏度高，測定 速度快，應用范圍廣，其中的紫外光和可見光分光光 度技術更是化學工業中必不可少的基本手段，并大 量用于如離子膜法燒堿生產中精鹽水中r、Bf、 CO-分析以及成品中NaCD3、At03的測定等。其 檢測限量一般可低至（1~ 10) @ 10- 5。但在實際應 用時，由于顯色反應、顯色條件、實驗儀器和操作技 巧等因素的影響，造成一些偏差，影響了分析的準確 性。本文重點討論外部因素對分析結果的影響及提 高分析的靈敏度和準確度的途徑。

1常見誤差原因分析

1-1顯色反應本身的誤差

????? 不同的顯色反應條件下，如有色物的穩定性、顯 色劑的加入量、酸度、反應時間等，對分析結果均有 一定的影響。

1-2儀器誤差

????? 單色光不純、儀器電壓不穩、靈敏度過高或過 低，吸光度< 0 2或> 0 8造成結果不準確;長時間 使用后，吸收池污染帶來偏差。

1-3分析操作不準確或不熟練

????? 主要表現在儀器調零不準、吸收池選擇不當、讀數不準，甚至錯誤操作等。

2應用技巧

2-1放大或縮小倍數法

????? 放大或縮小倍數法即選擇合適的吸光度測量范 圍，在不同吸光度范圍內讀數會引起不同程度的誤 差。為提高測定的準確度，應選擇在最適合的吸光 度范圍內進行測定。計算表明，最適宜的吸光度范 圍為0 2~ 0 &如果被測溶液濃度過低，吸光度低 于0 2可采用增加比色皿厚度的方法進行測定;如 果吸光度超過0 S可在比色時盡量采用比較薄的 比色皿。當然，這樣測定出的數值一定要進行折算， 計算式為:折算后吸光度=折算前測定值@標準比 色皿厚度A■目前比色皿厚度。

例:測定某樣品中鐵的含量時，制作鐵標準曲線 時用的吸收池的厚度為2 cm。而由于樣品含鐵量 低，用2 cm吸收池，測定出的吸光度為0 15Q改用 3 cm吸收池，測出值為0 224折算后：

吸光度=折算前測定值@標準比色皿厚度+目 前比色皿厚度=0 224 x 2 A3= Q 149。

該方法實際上是避免標準曲線在較低或較高濃 度處偏離朗伯-比爾定律的有效手段。

2-2標準樣作參照

????? 可見光和紫外光分光光度計法中通常采用相同 條件下制定的標準曲線。標準曲線法的特點是操作 簡便、快速，對重現性好、比較穩定的測定，準確度較 高。缺點是重現時受條件的影響較大，一般溫度、標 樣、顯色劑變化等對測定結果均有影響，甚至影響較 大。解決方式是在使用新的標樣試劑、顯色劑時，重 新制作標準曲線，在溫度變化大時，也需要重新制作 標準曲線。這樣，無形中增加了工作量，浪費了時 間，因此不能滿足工業分析的要求。但可以以帶標 準點的方式進行分析，尤其是在常規分析時比較高 效。具體方式是:在檢測樣品的同時，取樣品含量附近的1~2個點的標樣，與樣品同時進行顯色處理， 比較樣品的吸光度與標樣吸光度，就可以準確測定出待測物的含量了。例如：亞磷酸中鐵（+ 2價）的 質量分數正常在0 00 1 5% ~ 0 002 0%，指標值< 0 005%。分析中采用鄰菲啰啉顯色法，其中：①鄰 菲啰啉和鹽酸羥氨不穩定，需要重新配制，而反應條 件一旦與測定標準曲線時不一致，就會帶來誤差；② 生產中產品指標穩定，且指標值低，用標準曲線時會 遇到A<0 2的情況而帶來與朗伯-比爾定律的偏 差。因此取1~ 2個點的標樣，其Fe2+分別為0 001 0 0 001 2 mg，與樣品同時進行顯色、測定，并與樣 品的吸光度進行比較，計算出樣品中的Fe2+含量。 這樣分析，有效避免了每次檢測時均制備標準曲線， 操作簡便，對常規分析非常適用。缺點是當生產不 正常、產品指標過高或過低時，因不能較準地找出應 取標樣的點的位置，第1次檢測時只能分析出一個 粗略的范圍，需要縮小范圍進行第2次甚至第3次 分析，才能得出比較準確的結果。對一些被測物含 量低、含量值比較穩定、要求只是低于某一限量的測 定，用邊緣值判定取代絕對值判定就是一個比較好 的方法。所謂邊緣值判定就是指當被測組分低于一 個最低值時，可判該樣品為合格。在中間體分析中， 這種判定方式比較多見。如果將參照標準設為控制 標準，既可省去作標準曲線之繁，又達到提高分析時 效性的目的。

2-3其他

2-3-1比色池的校正

????? 進行定量分析時，要求所選用的一套吸收池的 厚度對光的吸收和散射性能一致。使用一段時間 后，有色溶液對比色池的腐蝕會造成比色池本身的 色差；當一些舊的比色池被更換后，新舊比色池之間 也有一些色差。取兩只吸收池，分別裝入任一種試 樣溶液及參比溶液，測量吸光度，然后將兩吸收池所 裝溶液對換，再測其吸光度。兩次測得的吸光度差 值大于1%時必須校正。其方法如下:將吸收池用 a i、2.,編號，均裝入樣品溶液，以空氣為參比測量 吸光度，得到A。、^I 2……等值。若以0號吸收池 為標準，則其他吸收池的校正系數次序為：B = A1 / A 0、艮=A 2 /A 0……。記錄這些吸收池的編號，在以 后的測定中，就可以利用這些校正系數來校正吸光 度讀數，即:A校=A測高檔的分光光度計有自動 置零系統，可將兩個池子的偏差置零。如果不對比 色池進行校正，至少應該選擇對比色池配對。即選 擇在規定波長下兩個比色池的透光率相差小于 0 5%的比色池作配對，在必要的情況時，需在最終 測量時扣除比色池間的誤差修正值。

2-3-2儀器電壓不穩

????? 現在使用最普遍的分光光度計有721、722、723等，紫外光/可見光系列有751、751、753等。因此，分析人員往往不注意工作電壓。實際上，工作電壓不 穩對測定結果的影響不容小視，尤其是用數字式分 光光度計和雜質含量極低時，其后果是數字波動大， 重現性不好，甚至無法測定。因此，工作時，分析人員應密切關注工作電壓，特別是在實驗結果波動大而又沒有明顯原因時，應當首先檢查工作電壓。改善方法是外加大功率的穩壓器。美析公司的紫外可見分光光度計產品內置穩壓電源，確保檢測的準確性，如可見分光光度計V-1100、v-1200、v-1300等型號，紫外可見分光光度計uV-1100、uv-1200、uv-1300等。

2-3-3靈敏度過高或過低

????? 一臺儀器工作時，已預先對其靈敏度進行了設定。靈敏度與穩定性相關，一般是靈敏度高則穩定 性稍差。因此正確選擇一個合適的靈敏度，對分析 檢測有事半功倍的效果。

3日常維護與保養

3-1控溫和控濕工作

????? 溫度和濕度是影響儀器性能的重要因素，它們 可以引起機械部件的銹蝕，使金屬鏡面的光潔度下 降，從而引起儀器機械部分的誤差或性能下降，造成 光學部件如光柵、反射鏡、聚焦鏡等的鋁膜銹蝕，產 生光能不足、雜散光、噪聲等，甚至使儀器停止工作， 進而影響儀器的壽命。維護保養時應定期加以校 正。嚴格控制溫度和濕度，地處南方地區的實驗室 尤其要注意此問題。美析紫外可見分光光度計儀器均內置了恒溫散熱系統。

3-2保障環境和儀器室內的衛生條件

????? 防鼠和防蟲一方面是保護電路設備不受損害， 另一方面也是對儀器精準度的最好保護。

3-3儀器保養工作

????? 儀器使用一定時間后，內部會積累一定量的灰 塵，定期開啟儀器外罩對內部進行除塵，同時將各發 熱元件的散熱器重新緊固，對光學盒的密封窗口進 行清潔，必要時對光路進行校準，對機械部分進行清 潔和必要的潤滑，最后，恢復原狀，再進行一些必要 的檢測、調校與記錄。