肉及肉制品中新霉素殘留檢驗的高效液相色譜測定方法
(1)試劑和材料 除特殊規定外，所用試劑均為分析純
①乙腈
②甲醇：紫外光譜純
③三乙胺
④磷酸(85%)
⑤氯化鈉
⑥磷酸鹽緩沖液
⑦混合提取液：磷酸鹽緩沖液—乙腈(1+)。
⑧硼酸鉀緩沖液：將2.5z硼酸溶于80mi水中，用50g/100ml氫氧化鉀溶液調pH至lO.5，用水定容至100ml。
⑨鄰苯二甲醛試劑：將100mg鄰苯二甲醛溶于Iml甲醇中，加入200ul 2—琉基乙醇和10ml硼酸鉀緩沖液，用棕色瓶(有蓋)貯存于冰箱中，1周內有效。
⑩堿性緩沖液：將76e四硼酸鉀溶于400mi水中，用50g/100ml氫氧化鉀溶液調pH至11.0，用水定容至500mi。
⑾洗脫劑：堿性緩沖液—甲醇(1十4)。
⑿陽離子交換樹脂;D152。
⒀硫酸新霉素標準品：生化試劑
⒁硫酸新霉素標準溶液：稱取適量的硫酸新霉素標準品(精確至0，lmg)，用水配成濃度為o.100rug/ml的標準貯備溶液，根據需要再用水配成適當濃度的標準工作溶液。
⒂新霉素衍生物標準溶液：將適量的標準工作溶液注入到陽離子交換柱中，進行衍生化反應，制成新霉素衍生物標準溶液，
(2)儀器和設備
①液相色譜儀：配有熒光檢測器
②高速組織搗碎機
③振蕩器
④離心機
⑤過濾漏斗;濾孔為80-120um、40—80/um
⑥陽離子交換柱：120mmX 5mm(內徑)玻璃柱。用堿性緩沖液將陽離子交換樹脂制成懸浮液，平衡2h，裝入玻璃柱中，高度約為6cra，用5ml洗脫劑淋洗，流速為0.8ml/min，然后用水洗至流出液呈中性，備用。
(3)測定步驟
①提取 稱取試樣約l0g(準確至0.1g)于一lOOml錐形瓶中，加人60ral混合提取液和2g氯化鈉，振蕩30min，經濾孔為80—120~m的過濾漏斗抽濾，殘渣用3x10ml混合提取液洗滌。合并濾液和洗液于一250rnl燒杯中。在沸水中加熱30min，取下，于3000r/min離心20min，置4℃冰箱中冷卻20min，然后經濾孔為40～80bm的過濾漏斗抽濾，收集濾液。
②衍生化 將濾液注入陽離子交換柱中，用lOml水洗柱，棄去流出液。將lml鄰苯二甲醛試劑注入柱中，反應5rain。然后加2ml洗脫劑洗脫柱上衍生物。棄去前面iml洗脫液，收集后面lml洗脫液，立即放置在一18~0冰箱中，15min后進行液相色譜測定。
③測定
a.色譜條件
色譜柱：ODSHypersi
柱溫：35~C：
流動相：77.5%甲醇水溶液中含0.09mol/L 三乙胺和o.45moI/L磷酸
流速：1.0ml/Illin
激發波長：345nm
發射波長：445nm
進樣量：10ul
b.測定 根據樣液中新霉素含量情況，選定峰面積相近的新霉素衍生物標準溶液。標準液和樣液中新霉素衍生物響應值均應在儀器檢測線性范圍內。對標準液和樣液等體積參插進樣測定。在上述色譜條件下，新霉素衍生物的保留時間約為6min。
④空白試驗 除不加試樣外，按上述測定步驟進行。
(4)檢測限和回收率
本方法的測定低限為50ug/kg。
在0.05-0.50mg/kg添加濃度水平上的回收率范圍為90.4%-96.3%
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標準
