在克隆一個基因后的下一步,往往是將其導入不同類型細胞,以分析其表達,測定表達對細胞生長的影響,或將高表達的基因產物純化。將外源DNA導入哺乳動物細胞有兩種途徑:穩定(永久)或暫時性轉染。穩定轉染的目的是將轉移基因整合到細胞染色體DNA上,形成穩定表達轉移基因的細胞系。一般需要共轉染一個選擇標記,用于追蹤轉染成功的細胞或轉染效率。...
T細胞的CRISPR編輯實驗方案1.T細胞受體特異性gRNA設計在人體內,T細胞受體(TCR)由TRA和TRB基因分別編碼的α鏈和β鏈組成。實驗方案描述的TCR敲除應用數據,選擇TCR α或β恒定區(TRAC或TRBC)內的兩個靶點。化學合成的gRNA相比體外轉錄的mRNA細胞毒性更小,修飾后的RNA穩定性更高。...
該方法的轉化效率通常很低。 脂質體染法 指質體能在體內或體外提供運載外源性遺傳物質進入細胞的載體。脂質體介導的基因轉移的最大優勢在于能在活體內應用。 受體介導的基因轉移 依靠受體介導的細胞內吞途徑以轉移外源基因。受體介導的基因轉移方法是在質粒DNA和某種特異的多肽(配體)之間形成復合體,而這種多肽能為細胞表面的肥體所識別。...
本實驗建立小鼠嚴重燙傷模型,通過采用慢病毒(購自上海吉凱基因公司)轉染的方式穩定有效地下調了和上調了DC細胞中TIPE2表達,觀察其對DC免疫功能的影響。該研究通過動物體內和體外實驗旨在明確TIPE2對DC介導T淋巴細胞免疫抑制功能的影響,為尋求嚴重感染并發癥的防治途徑提供新思路。通過采用慢病毒(購自上海吉凱基因公司)轉染的方式穩定有效地下調了和上調了DC細胞中TIPE2表達。...
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